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              胎牛血清白蛋白提取方法

              日期:2022-08-05 08:29
              瀏覽次數:29
              摘要: 胎牛血清白蛋白(BSA),又稱第五組分,是牛血清中的種白蛋白,包含583個氨基酸殘基,分子量為66.430 kDa,等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用,例如在western blot中作為Blocking agent;在酶切反應緩沖液中加入BSA,通過提高溶液中蛋白質的濃度,對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性,能減輕有些不利環境因素如加熱,表面張力及化學因素引起的變性。是胎牛血清中的種球蛋白,般獲取胎牛血清白蛋白,常常運用的方法是加熱法。 具體方法: ...

              胎牛血清白蛋白(BSA),又稱第五組分,是牛血清中的種白蛋白,包含583個氨基酸殘基,分子量為66.430 kDa,等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用,例如在western blot中作為Blocking agent;在酶切反應緩沖液中加入BSA,通過提高溶液中蛋白質的濃度,對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性,能減輕有些不利環境因素如加熱,表面張力及化學因素引起的變性。是胎牛血清中的種球蛋白,般獲取胎牛血清白蛋白,常常運用的方法是加熱法。



              具體方法:


              白蛋白含量測定 選用溴jia酚氯法,以胎牛血清白蛋白為規范. 白蛋白純度的測定 選用醋酸纖維素薄膜電泳法。吸光度值的測定 用分光光度計直接測定蛋白質溶液在波長為403 nm處的光吸收值,然后折算成濃度為10 g/L時牛血清白蛋白的光吸收值,用A403表明。


              胎牛血清白蛋白的生產工藝 新鮮抗凝牛血用LC-6型大容量離心機(3 000 r/min×30 min)離心分別出血漿,加定量的蒸餾水稀釋,再參與恰當的穩定劑和蛋白沉淀劑,然后按下述方法進行試驗處理:


              1.不樣pH值溶液對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件固定的情況下,試驗不樣pH值對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。


              2.不樣加熱保溫時間對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和其它條件固定的情況下,試驗不樣加熱保溫時間對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。


              3.不樣稀釋倍數對白蛋白的收率和質量的影響 在選定的pH值和保溫時間及其它條件固定的情況下,試驗不樣稀釋倍數對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。


              4.不樣加熱溫度對白蛋白的收率和質量的影響 在其它條件選定的情況下,試驗不樣加熱溫度對白蛋白的收率、純度及A403值的影響。

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