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              GST標簽蛋白純化樹脂?操作規程

              日期:2022-08-04 14:23
              瀏覽次數:6
              摘要: GST標簽蛋白純化樹脂操作規程: 1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時. 2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。 3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。 4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。 5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MT...

              GST標簽蛋白純化樹脂操作規程:

              1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

              2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

              3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

              4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

              5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

              6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

              7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

              8、結果分析

              a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(完全培養基加MTT,無細胞)或空白藥wu 孔OD 值(完全培養基加受試藥wu的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

              b、求出T/C = 50% 時的藥wu濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥wu濃度(IC90)。


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